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凱氏定氮儀是依據經典凱氏定氮方法設計的自動測定系統(tǒng),根據蛋白質中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質含量。該儀器安裝、操作簡單;適用于糧油檢測、飼料分析、植物養(yǎng)分測試、土肥檢測、環(huán)保、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的分析、教學及研究中主要用來檢測糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學品等中的氨氮、蛋白質氮等含量,是操作人員的理想工具,同時利用定氮儀也可以二氧化硫等物質,是實驗室比較重要的理化分析儀器。
一 凱氏定氮儀主要應用方面
1. 蛋白質測定
國家標準方法中食品中蛋白質測定、飼料中粗蛋白質的測定及植物油料粗蛋白質的測定等;谷元蛋白粉的測定;胡思剛,劉革偉用凱氏定氮法檢測脫脂奶粉中蛋白質含量[1]、張玉葵 葉爾太的測定牛乳中蛋白質含量的方法[2]等。
2. 氮的測定
國家標準中乳與乳制品中非蛋白氮含量的測定、淀粉及其衍生物氮含量測定、土壤中氮含量的測定、復混肥料中總氮含量測定、肥料中銨態(tài)氮含量的測定、尿素的測定方法等;朱亞民與楊玲潔研究定氮儀測定水中氨氮[3]、譚杰和羅蜀云用定氮儀測定天然橡膠氮含量[4]、熊芳、易偉亮用自動凱氏定氮儀測定醬油中銨鹽含量[5] 等。
3. 揮發(fā)性鹽基氮測定
葛曉鳴等用全自動凱氏定氮儀測定金槍魚肉中揮發(fā)性鹽基氮含量[6]、呂玉瓊等用全自動定氮儀測定肉類中的揮發(fā)性鹽基氮[7]、魚粉中揮發(fā)性鹽基氮的測定[8],張建寧與吳東林用自動凱氏定氮儀測定水產品、肉及制品中的揮發(fā)性鹽基氮含量及不確定度評定[9] 等。
4. 其它方面
詹德江,陳曉云等用凱氏定氮儀測定水發(fā)產品中甲醛的含量[10]、陳曉云應用凱氏定氮儀測定黃花菜中二氧化硫的含量[11]、乙小娟、俞曄等用全自動凱氏定氮儀測定己內酰胺中揮發(fā)堿[12]等。
二 凱氏定氮儀的使用注意事項
1 樣品前處理
樣品應盡量選取具有代表性的,大塊的固體樣品應用粉碎設備打得細小均勻,液體樣要混合均勻。
2 模塊化消解裝置消化樣品
消化過程中,首先確保濃硫酸量足夠,如樣品脂肪含量較高時,應適當增加硫酸量;其次對某些樣品炭化易產生泡沫,這時可采用sh520消解爐曲線升溫或手動控制升溫,讓消解溶液沸騰均勻后再提高消解溫度,直至消化液呈透明藍綠色再消化0.5h或1h。因為炭化過程中,升溫速度過快會使樣品溢出消化管或濺起粘附在管壁導致無法消化*而造成氮損失,影響結果準確性。
3 上機測定
儀器稀釋水采用中性去離子水;蒸汽發(fā)生瓶內的水必須保持酸性;硼酸吸收液配制時應用中性去離子水,避免堿性物質的混入,盛裝硼酸吸收液的容器應刷洗干凈;堿液應用中性去離子水配置;滴定用的標準酸必須按照標準配制和標定。
上機測試樣品前,應打開儀器預熱,放一支消化管空蒸一次,排除蒸餾管路中的空氣。
蒸餾時必須加堿,加入堿的作用一是中和硫酸,二是使溶液處于強堿性,這樣才能使 (NH4)2SO4變成NH3被硼酸吸收,通常是消化取用濃硫酸的四倍體積(40%NaOH)。硫酸銅可作為催化劑,并在蒸餾時作堿性反應指示劑,氫氧化鈉是否足量.可借助硫酸 銅在堿性條件下生成的褐色沉淀或深藍色的銅氨絡離子指示。若溶液的顏色不改變,則說明所加的堿液不足。
蒸餾是否*,半自動凱氏定氮儀可用精密 pH試紙測冷凝管的冷凝液來確定,中性說明已蒸餾*。全自動凱氏定氮儀目前主要是以蒸餾體積與設置時間(經驗值)確保蒸餾*。
蒸餾結束后,滴定主要是是分為人工滴定和機器自動滴定計算和打印實驗結果。要求操作者根據實際情況,按照要求操作。
四 凱氏定氮儀使用的優(yōu)缺點
按照凱氏定氮原理設計的凱氏定氮儀運用化學、物理學、電學、自動控制等方面新技術采用可以批量處理樣品,簡單易于操作,對食品、農作物、肥料、土壤、水等物質中的氮、蛋白質含量進行定量測定,其結果可靠,且能夠滿足高通量檢測要求,基本能夠客觀的反映出樣品含蛋白質水平。同時還可以應用于揮發(fā)性鹽基氮,二氧化硫燈物質的測定,應用范圍廣。
凱氏定氮法的主要缺陷是方法的特征性差,得到的測量結果只能代表樣品中所有含氮化合物的總量,不能準確表示蛋白質的含量,這是因為在消化過程中除蛋白質中的氮轉化成(NH4)2SO4外,一些非蛋白質類的含氮化合物(如生物堿、尿素、三聚氰胺等)也能轉化成 (NH4)2SO4,計算氮的含量時,認為所有的氮都來源于蛋白質,因此測定結果比實際值偏高。所以凱氏定氮儀也存在此問題。
因此,使用凱氏定氮法這一技術的前提便是:樣品是真正的蛋白質樣品,沒有被造假。參照此前提,技術便能準確為人服務。
五 發(fā)展
隨著社會的進步,科學技術的發(fā)展。國內的分析儀器行業(yè),也開始蓬勃發(fā)展起來,以前我國僅能生產半自動型,且技術含量低,可靠性差,水平落后,自動定氮儀只能依賴進口,并且價格昂貴。